植物葉綠素測定儀的實驗步驟

植物葉綠素測定儀是用來測量葉綠素含量的儀器。它可以即時測量植物的相對葉綠素含量（單位SPAD）或“綠色程度”，從而了解植物的真實硝基需求量，幫助您了解土壤硝基缺乏情況。或者如果施用過多的氮肥。您可以通過此儀器，提高氮肥的利用率并保護環境。下面介紹植物葉綠素測定儀的實驗步驟：

1.取新鮮的植物葉子（或其他綠色組織）或干燥的材料，擦去組織表面的污垢，剪碎（去掉中脈），拌勻。

2.稱取0.2g新切好的樣品，共3份，分別放入研缽中，加入少量石英砂、碳酸鈣粉和2-3ml 95%乙醇，研磨成均質漿液，再加入10ml 乙醇，并繼續研磨，直到組織變白。 靜置 3 到 5 分鐘。

3.取1張濾紙，放入漏斗中，用乙醇潤濕，將提取液沿玻璃棒倒入漏斗中，過濾至25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數次，然后連同殘渣一起倒入漏斗中。

4.用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直到濾紙和殘渣沒有綠色為止。然后用乙醇定容至 25ml，搖勻。

5. 將葉綠體色素提取物倒入光徑1cm的比色皿中。以 95% 乙醇為空白，在 665 nm 和 649 nm 波長處測量吸光度。

實驗結果計算：將測定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。據此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca、Cb：mg/L），二者之和為總葉綠素的濃度。然后根據下式可進一步求出植物組織中葉綠素的含量：

葉綠素含量（mg/g）=[葉綠素濃度×提取體積×稀釋倍數]/樣品鮮重（或干重）。